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操作细胞铺板的实验小技巧
文章来源:2022世界杯中国(官方网站)   添加时间:2022/7/18 8:39:10 点击率:290

做细胞生物学试验,细胞铺板是比较常见的一个试验。但是有很多人铺得不是很均匀,要么中心密周围稀,要么周围密中心稀。遇到这些情况该怎么办呢?接下来就为大家介绍一下在实验过程中操作细胞铺板的技巧。

一般是96孔板,每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再继续加剩下的半边板子,都加完后盖上盖子,左手悄悄扶住板的左边,右手悄悄敲击板的右边缘,留意掌握力度,太强或次数太多会导致细胞集成堆,将板顺时针旋转,顺次敲击剩下三个边,静置约5分钟,放入37度培育箱。

6孔板、12孔板或24孔板,均可采用将个孔加入少量无血清培育基,晃动滋润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样办法滋润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候能够防止加在中心,中心细胞多,而加在周边晃匀后会出现周边细胞多中心少的现象,细胞涣散较均匀,留意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。细胞悬液加完后,将细胞培育板举高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之涣散。假如试验室有平板振动器的话,建议用这个仪器稍振动一下,作用不错,振幅小,频率高。

细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充沛悬浮。还有转移到六孔板后,需求晃动,晃的时候不要让细胞液转圈,不然细胞就全被带到中心去了,就会不均匀。

一瓶细胞长满后,正常处理,在培育瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不必调查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,轻微的左右前后各三圈。基本上24小时之后再调查,每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需求的悉数液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下调查,假如不均匀,按上述办法再晃。假如细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子。放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但摇晃后直接放入培育箱中,不要再做过多的运动,不然很容易就又聚到中心去了。

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